Унифицированная карточка ресурса.

(Информационние карты диссертаций)

.
Дата материала:   28.01.2008
Название:   Каталитическая субъединица энтеропептидазы человека: получение, характеризация ферментативных свойств и моделирование мутаций, облегчающих ренатурацию и повышающих специфичность фермента
Основное описание:   Цель диссертации - получение рекомбинантной каталитической субъединицы человека, исследование ее ферментативных и физико-химических свойств, моделирование структурных изменений, облегчающих её ренатурацию, и исследование структурных элементов, ответственных за специфичность фермента при расщеплении пептидных субстратов. В результате исследования: 1. Впервые осуществлена экспрессия каталитической субъединицы энтеропептидазы человека (L-НЕР) в Escherichia coli в составе гибридного белка с тиоредоксином в качестве белка-носителя. 2. Разработана процедура ренатурации гибридного белка тиоредоксин/L-HEP, позволяющая получать до 10 мг активного фермента с литра культуры. 3. Впервые охарактеризована ферментативная активность каталитической субъединицы энтеропептидазы человека. Показано преимущество фермента человека по сравнению с ферментами быка при гидролизе рекомбинантных гибридных белков. 4. Показана высокая устойчивость ферментативной активности L-HEP к действию денатурирующих агентов, таких как детергенты, повышенная температура, отличная от физиологической кислотность буфера и восстанавливающие агенты. Показано, что взаимодействие L-HEP с ингибиторами проходит по типу трипсин-подобных сериновых протеиназ. 5. Показано, что высокие концентрации NaCl и CaCl2 ингибируют расщепление специфических субстратов L-HEP, при этом не влияя на скорость гидролиза неспецифических субстратов. 6. Построена пространственная модель L-HEP. Проведено молекулярное моделирование замещения цистеинов в положениях 122, 136 и 201 с целью получения фермента с более высоким выходом ренатурации. 7. Показана вторичная специфичность L-HEP к хромогенным субстратам и белкам с ароматическими и большими гидрофобными остатками в положении Р2. 8. Впервые выявлены различия ферментативных свойств каталитических субъединиц энтеропептидаз человека и быка. Разработанная методика получения рекомбинантной каталитической субъединицы энтеропептидазы человека позволяет не только облегчить дальнейшие исследования этого белка, но и более широко использовать технологию получения рекомбинантных белков в составе гибридов с белком-носителем.
Шифр специальности:   03.00.02 Биофизика
Авторы (ФИО):   Остапченко Валерий Геннадиевич
Степень соискателя:   канд. техн. наук
Год защиты:   2006
ГРНТИ:   34.17.15 Молекулярная биофизика
Информация о источнике:   Российская государственная библиотека, отдел диссертаций - http://www.rsl.ru/i
dex.php?doc=104

Приоритетные направления:   Живые системы;

Связанные материалы
Диссертация -> Организация
Место защиты Московский физико-технический институт (государственный университет)
  Rambler's Top100